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单味中药对黑素细胞黏附和迁移的影响

  广州新世纪白癜风医院的专家认为白癜风是一种由于皮肤黑色素细胞被破坏,导致皮肤因黑色素缺乏而出现白斑的疾病。任何年龄均可发病,以儿童和青壮年多见,属中医的“白癜”、“斑驳”等范畴。此常顽固,慢性病程,易诊难治,影响美容。近年来,中药治疗白癜风效果显著,本文从古今治疗白癜风方剂中筛选14味常用中药,观察这些中药乙醇提取物对黑素细胞黏附和迁移的影响, 探讨其作用机理, 供临床治疗参考。

  材料及方法

  1. 材料

  角质形成细胞无血清培养基(KC-SFM)购自美国Gibco公司;纤维连接蛋白为美国sigma公司产品;48孔培养板和Transwell培养板购目美国Costar公司.

  2. 黑素细胞培养

  取临床包皮环切术切除的正常人包皮,用消化酶Dispass-11消化,分离表皮与真皮,表皮用胰酶消化,分离角质形成细胞和黑素细胞,用KC-SFM混合培养黑素细胞和角质形成细胞, 5%C02、37。C恒温培养箱中培养72 h。用选择性消化法(0.05%胰蛋白酶和0.02% EDTA)分离黑素细胞,培养于KC-SFM通过形态特点和黑素细胞特异性标志酪氨酸酶相关蛋白1染色鉴别。

  3. 中药提取

  14味中药分别研碎(过80目筛),用70%乙醇回流提取3天,经过滤、低温蒸馏得到稠膏状提取物,用二甲基亚砜溶解,调整浓度至相当于生药10g /ml,-20℃保存备用。试验时分别用KC-SFM溶解,滤过,终浓度相当于生药2.5 mg/ml

  4. 黑素细胞黏附测定

  48孔培养板每孔用含10 ug纤维连接蛋白的0.5 ml KC-SFM处理2 n,然后用PBS洗去未结合的蛋白,黑素细胞分别用不含(对照)和含中药乙醇堤取物的KC-SFM培养3天,经胰酶消化、热灭活胎牛血清中和胰酶的作用、PBS洗,以5x104/ml细胞重悬于KC-SFM,每孔加入400 ul, 1.5 h后,用PBS洗去未黏附的细胞,黏附的细胞用胰酶消化然后计数。所有步骤至少重复3次。

  5. 黑素细胞迁移测定

  取Transwell培养板,将培养小室用带8.0 um孔径微孔的聚碳酸酯膜分成上下2室,该腹试验前1天用5 ug纤维连接蛋白包被,经室温过夜晾干.黑素细胞(2x105/100 1)分别加于上室(聚碳酸酯膜上),用不含(对照)和含中药的KC-SFM培养18 n,取出聚碳酸酯膜用甲醇固定,苏木素伊红(HE)染色、腹上层(未迁移到下层)的黑素细胞用棉拭擦去,高倍镜下随机取4个高倍视野计数通过8.0 pm孔径微孔迁移到膜下层的黑素细胞、所有步骤至少重复3次。

  统计学处理

  采用SPSS统计软件对数据进行统计分析,所测数据用单因素、单侧Dunnett 检验分析(a=0.05).

  结果

  1. 中药对体外培养黑素细胞黏附的影响

  结果显示黏附黑素细胞百分数 (percent) 为黏附细胞/总细胞数。白芷、丹参、女贞子、菟丝子、红花与对照相比差异有显著性 (P均<0.05) , 补骨脂与对照相比差异有极显著性(P<0.01)

  2. 中药对体外培养黑素细胞黏附的影响

  结果显示白芷、女贞子、刺蒺藜和黄芪与对照相比差异有显著性 (P均<0.05) , 补骨脂与对照相比差异有极显著性 (P<0.01) 。

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